關(guān)鍵詞:液體培養(yǎng)基 微生物 芽孢 細(xì)菌 高壓蒸汽滅菌 溫度 壓力 過(guò)濾除菌 濾菌器 濾膜 無(wú)菌操作 紫外線(xiàn)滅菌 化學(xué)滅菌
液體培養(yǎng)基是微生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域中常用的一種培養(yǎng)基形式,與固體培養(yǎng)基相對(duì)應(yīng),它主要呈液態(tài),可以通過(guò)通氣或振蕩的方式培養(yǎng)微生物或動(dòng)植物細(xì)胞。液體培養(yǎng)基在配制過(guò)程中容易受到細(xì)菌、真菌、芽孢等微生物的污染,從而影響實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖。因此需采取有效方式對(duì)液體培養(yǎng)基充分滅菌,以保證實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。
一、高壓蒸汽滅菌
高壓蒸汽滅菌是實(shí)驗(yàn)室中常用的滅菌方法之一,適用于耐高溫的物體、器皿及培養(yǎng)基的滅菌。其原理是利用高溫高壓的蒸汽來(lái)破壞微生物的細(xì)胞結(jié)構(gòu),從而達(dá)到滅菌的目的。
操作步驟如下:
1.準(zhǔn)備:將配制好的液體培養(yǎng)基分裝至合適的容器如三角瓶或試管中,分裝好的培養(yǎng)基用棉塞、紗布或無(wú)菌透氣封口膜等包扎密封,放入消毒筐中等待滅菌。注意培養(yǎng)基不要裝得太滿(mǎn),一般裝量不超過(guò)容器的2/3即可,以防在滅菌過(guò)程中因容器內(nèi)外壓力不平衡而導(dǎo)致培養(yǎng)基溢出;容器與容器之間應(yīng)留有空隙,不宜太過(guò)擁擠,保證蒸汽可以在容器之間流通。
2.裝鍋:將消毒筐放入壓力蒸汽滅菌鍋內(nèi),關(guān)緊鍋門(mén),防止因鍋內(nèi)蒸汽溫度壓力過(guò)高而發(fā)生安全事故。打開(kāi)蒸汽進(jìn)汽閥門(mén),開(kāi)始滅菌。
3.加熱升溫:調(diào)節(jié)滅菌鍋的排汽閥,使鍋內(nèi)壓力及溫度逐漸升高至規(guī)定的滅菌要求。在蒸汽壓力為0.105MPa(約1.05大氣壓)時(shí),鍋內(nèi)溫度可達(dá)到121℃。
4.滅菌:在達(dá)到滅菌規(guī)定的溫度和壓力后,保持一段時(shí)間,通常為121-124℃,滅菌30min左右,以確保細(xì)菌、真菌、芽孢等微生物被殺滅。記錄滅菌的溫度及時(shí)間,做到可追溯。
5. 降壓取物:滅菌結(jié)束后,關(guān)閉蒸汽進(jìn)汽閥門(mén),調(diào)節(jié)排汽閥或通過(guò)自然降壓的方式使鍋內(nèi)壓力降至零,打開(kāi)滅菌鍋門(mén)取出培養(yǎng)基。注意從鍋內(nèi)取出物品時(shí)應(yīng)戴好手套,防止?fàn)C傷。
圖示為高壓蒸汽滅菌
二、過(guò)濾除菌
對(duì)于一些不耐熱的液體培養(yǎng)基,如某些植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑或有機(jī)物,溫度過(guò)高容易分解,可以采用過(guò)濾除菌的方法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行處理。
操作步驟如下:
1.準(zhǔn)備:選擇合適的濾菌器,通常使用孔徑為0.45μm的薄膜濾菌器,使用前需對(duì)濾膜及收集濾液的容器進(jìn)行高溫滅菌處理,防止濾膜及容器上的微生物污染培養(yǎng)基。濾膜應(yīng)定期檢查更換,防止過(guò)濾效果降低。
2.過(guò)濾:將需要除菌的液體培養(yǎng)基在無(wú)菌條件下通過(guò)濾菌器進(jìn)行過(guò)濾,以去除培養(yǎng)基中的微生物及芽孢。
3.收集:將過(guò)濾后的無(wú)菌培養(yǎng)基收集到無(wú)菌容器中,并密封保存?zhèn)溆谩?br style="-webkit-tap-highlight-color: transparent; margin: 0px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important;"/>
圖示為過(guò)濾除菌用濾膜
三、其他滅菌方法
除了上述兩種常用的滅菌方法外,還有一些其他方法也可以用于液體培養(yǎng)基的滅菌,如紫外線(xiàn)滅菌、化學(xué)滅菌等。但這些方法通常具有局限性,如紫外線(xiàn)滅菌穿透力弱,只適用于空氣及物體表面滅菌;化學(xué)滅菌可能殘留有害物質(zhì),影響實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的正常生長(zhǎng)等,因此在實(shí)際應(yīng)用中紫外線(xiàn)滅菌及化學(xué)滅菌較少采用。
四、注意事項(xiàng)
1.滅菌時(shí)間:高壓蒸汽滅菌時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,過(guò)長(zhǎng)可能導(dǎo)致培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分被破壞,過(guò)短則可能無(wú)法殺滅微生物及芽孢。
2.溫度控制:在滅菌過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格控制溫度,確保達(dá)到所需的滅菌溫度并保持足夠的時(shí)間。
3.無(wú)菌操作:過(guò)濾除菌的整個(gè)過(guò)程要保持無(wú)菌操作,避免任何可能的污染。
4.保存條件:滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用,如需保存應(yīng)置于適當(dāng)?shù)臏囟认拢ㄈ?0℃以下),并定期檢查是否有污染現(xiàn)象發(fā)生。